TECNICAS DE HIBRIDACIÓN (Western Blot)- Cáncer de Cérvix

 TEMA: Las proteínas E6 / E7 son marcadores potenciales para la detección y el diagnóstico de lesiones precancerosas y cáncer de cuello uterino en una población china

Se recolectaron muestras de citología cervical y se congelaron para la extracción de proteínas agregando tampón de lisis celular rápida RIPA. Los extractos de proteínas totales (25 μg) se separaron mediante electroforesis en gel de poliacrilamida-dodecilsulfato de sodio , de acuerdo con el peso molecular de las oncoproteínas E6 / E7 (17 kDa de HPV16) .Después de la electroforesis, las muestras se transfirieron a membranas de fluoruro de polivinilideno. Las membranas se bloquearon  y el anticuerpo monoclonal anti-VPH 16 (E7) y policlonal anti-VPH16 humano (E6) se incubaron con las membranas. Los anticuerpos primarios y secundarios contra GAPDH se mezclaron con soluciones de anticuerpos para las proteínas diana. Después de la incubación con los primarios, las membranas se incubaron  con los anticuerpos secundarios para la proteína E7 de HPV16 e IgG H&L para la proteína E6 de HPV16. 

NOTA: Las bandas de proteína en las membranas se detectaron usando un kit de quimioluminiscencia mejorada  y se expusieron a una película de rayos X . La extensión del valor de gris de las bandas de proteína se determinó usando un Densitómetro Personal SI y el análisis densitométrico se tomó usando el software ImageJ.

Figura 1. Se realizó un análisis densitométrico de las oncoproteínas del virus del papiloma humano (VPH) E6 / E7 en transferencias Western para cuantificar la positividad de la oncoproteína E6 / E7 en muestras citológicas cervicales utilizando un valor umbral positivo del 20% (proporción de E6 o E7 a gliceraldehído 3 -fosfato deshidrogenasa [GAPDH]). (A) Valor porcentual de E6 / GAPDH; (B) valor porcentual de E7 / GAPDH; (C) Análisis de transferencia Western de oncoproteínas E6 / E7 en muestras representativas con definición de expresión de proteínas (+ o -). 1-13: muestras de pacientes infectados por VPH, 14: muestra de control negativo de un voluntario san

REFERENCIA:

Shi, W., Liu, H., Wu, D., Tang, Z., Shen, Y., & Guo, L. (2017). E6/E7 proteins are potential markers for the screening and diagnosis of cervical pre‑cancerous lesions and cervical cancer in a Chinese population. Oncology Letters, 14, 6251-6258. https://www.spandidos-publications.com/10.3892/ol.2017.6932